Как правильно сделать выписку из протокола образец: Протокол (выписка)

Содержание

срок действия, образец, как выглядит

С помощью протокола документируют происходящее на собрании или заседании. В организации, созданной на основе членства участников — физических и юридических лиц — коллегиальные решения обязательны для исполнения. Собрание как высший орган управления существует в коммерческих (ООО, АО, ПАО) и некоммерческих (педсовет, профсоюз, садовое товарищество, родительский комитет, ТСЖ и др.) учреждений. Протокол может содержать несколько листов текста. Если необходимо донести какое-либо из принятых решение до заинтересованной стороны, используют выписки из него.

И сегодня мы узнаем, какова форма выписки из протокола, как проходит ее оформление, и что для этого потребуется.

Общая информация

Понятие и особенности выписки из протокола

Выписка из протокола — копия его отдельных частей, сформированная и заверенная установленный образом. В законодательстве нет особых норм, регулирующих порядок составления выписки. Часто правила по подготовке, оформлению и заверению документа содержатся в локальных нормах — принятых в организации инструкциях по делопроизводству. Если таких нет, руководствуются:

  • ГОСТ Р 7.08-2013. В нем есть определение понятия «выписка из документа», которое применяется в отношении выписки из протокола;
  • ГОСТ Р 6.30-2003. Включает правила оформления документов, в том числе порядок заверения, внесения реквизитов;
  • действующим до сих пор Указом Президиума ВС РФ СССР № 9779-X от 04.08.1983. Он определяет, что выписка из документов (в т. ч. протоколов) должна выдаваться по требованию любого гражданина или организации, чьи права затронуты обозначенными там решениями;
  • нормами, регулирующими деятельность разных юридических лиц.
    В отношении ООО к таким относится, например, ФЗ № 14 от 08.02.1998 г.

Заполнение документа

ГОСТом рекомендовано делать выписку на фирменном бланке организации. Она состоит из нескольких частей:

  • вводной (наименование, дату и место проведения собрания, список присутствующих с распределением по ролям, отметку о кворуме). Воспроизводится в соответствии с протоколом;
  • основной — нужные абзацы из повестки дня, разделы «СЛУШАЛИ», «ВЫСТУПИЛИ»;
  • результирующей части (решение) из раздела «ПОСТАНОВИЛИ»;
  • блок «Подписи»: перечень участников, подписавших протокол, их ФИО.

В конце синей шариковой или гелиевой ручкой проставляется заверение.

Выписка из протокола общего собрания трудового коллектива о награждении (ее образец) доступен для просмотра ниже, скачать его можно здесь.

Выписка из протокола общего собрания трудового коллектива о награждении

Выписка из протокола трудового коллектива о награждении — 1 Выписка из протокола трудового коллектива о награждении — 2

Скачать выписку из протокола педагогического совета (ее образец) можно здесь.

Выписка из протокола педсовета (образец)

Выписка из протокола профсоюзного собрания также доступна для скачивания.

Выписка из протокола профсоюзного собрания (образец)

Выписка из протокола заседания аттестационной комиссии также доступна для скачивания.

Выписка из протокола заседания аттестационной комиссии

Выписка из протокола заседания аттестационной комиссии — 1 Выписка из протокола заседания аттестационной комиссии — 2

Функции

Выписка необходима для предоставления заинтересованным сторонам, контрагентам, государственным структурам. Чаще всего ее оформляют в двух случаях:

  • в протоколе содержится информация, представляющая коммерческую или личную тайну;
  • полный текст протокола слишком большой.

Выписки, посвященные какому-либо решению, могут рассылаться заинтересованным сторонам (работникам, филиалам организации). Часто таким образом руководство доносит предписания и приказы до исполнителей.

О том, как оформить выписку из протокола, читайте ниже.

Порядок получения документа

Составление

Протокол подшивается в тетрадь и хранится в архиве организации. Выписки из него готовит секретарь по запросу заинтересованного лица, он же чаще всего ее заверяет (если в уставе не определено иное).

Как правильно составить выписку:

  • Вводная часть воспроизводится, как в протоколе. Проставляется дата, место, наименование документа («Выписка из протокола общего собрания ООО «Цветочек» № XX»). Указываются председатель, секретарь, присутствующие на заседании участники. Особо отмечается, есть ли кворум.
  • Основная часть включает цитату из повестки дня с указанием порядкового номера в очереди вопросов. Далее иду разделы «СЛУШАЛИ» (ФИО докладчика), «ВЫСТУПАЛИ» (имена тех, кто высказывался по вопросу).
  • Резолютивная часть — принятое решение («ПОСТАНОВИЛИ»).
  • Перечень участников, подписавших протокол, без проставления реальных автографов (необходимо заменить на слова «Личная подпись»), напротив — их ФИО.

Заверение

Заверение необходимо для того, чтобы выписка получила юридическую значимость. Оно оформляется согласно ГОСТ Р 6. 30-2003. Секретарь или иное должностное лицо, уполномоченное подписывать документы, вносит:

  • слово «Верно»;
  • должность составителя;
  • подпись и расшифровку;
  • дату составления и заверения;
  • пометку, где находится оригинал протокола.

Если выписка предназначена для предоставления в стороннюю организацию, проставляют печать. Ее нужно ставить так, чтобы частично покрывать должность и роспись составителя.

Выписку готовят как в отношении одного вопроса, так и нескольких. Она бесплатна; срок изготовления зависит от того, кто заверяет документ. В некоторых организациях принципы ведения делопроизводства определены в локальных инструкциях. Иногда лица, имеющие право заверения, прописаны в уставе. Ими могут быть генеральный директор, руководитель подразделения, председатель правления.

Важная информация

  1. Есть ли разница между выписками из протокола собраний коммерческой или некоммерческой организации (педсовета, СНТ)? Выписки из протокола составляются унифицированным образом.
    Разница может заключаться в специфике самого протокола. Например, если уставом определено правило ведения подробного документирования, помимо основных разделов могут быть приведено обсуждение вопроса: реплики, особые мнения, ход голосования. На оперативных или внеплановых собраниях ведут краткий протокол, поэтому выписка может не содержать раздел «ВЫСТУПИЛИ», а только «СЛУШАЛИ» и принятое решение.
  2. Нужно ли заверять выписку у нотариуса? Практика показывает, что финансовые и государственные структуры (налоговая и ПФР) часто требуют нотариального заверения выписок по примеру протоколов. Согласно ФЗ № 14, документирование хода собрания ООО должно быть удостоверено присутствующим на нем нотариусом, если в уставе не прописан иной порядок. Обязательно заверение протокола, если решения касаются финансовых вопросов деятельности ЮЛ или смена руководства. Не каждый нотариус готов заверить выписку, если он не следил за ходом заседания. Те, кто соглашаются, требуют оригинал протокола, в котором удостоверены подписи участников.
    Даже если в уставе прописан договорной порядок принятия решений, при обсуждении важных вопросов рекомендуется приглашать нотариуса. В спорных ситуациях можно сослаться на устав, в котором прописано проведение собраний без юриста, и определено должностное лицо, имеющее право заверять документы.

Выписка из протокола общего собрания снт \ Акты, образцы, формы, договоры \ КонсультантПлюс

  • Главная
  • Правовые ресурсы
  • Подборки материалов
  • Выписка из протокола общего собрания снт

Подборка наиболее важных документов по запросу Выписка из протокола общего собрания снт (нормативно–правовые акты, формы, статьи, консультации экспертов и многое другое).

  • Акционерное общество:
  • Акционер
  • Акционерное общество
  • Акционерное соглашение
  • Акционерное соглашение образец
  • Акционерные общества с государственным участием
  • Показать все
Еще
  • Акционерное общество:
  • Акционер
  • Акционерное общество
  • Акционерное соглашение
  • Акционерное соглашение образец
  • Акционерные общества с государственным участием
  • Показать все
  • Многоквартирный дом:
  • Автономное отопление
  • Адресные таблички
  • Акт о протечке
  • Акт опломбировки
  • Благоустройство дворовых территорий
  • Показать все

Формы документов

Судебная практика

Зарегистрируйтесь и получите пробный доступ к системе КонсультантПлюс бесплатно на 2 дня

Определение Третьего кассационного суда общей юрисдикции от 27. 06.2022 по делу N 88-9590/2022
Категория спора: Право собственности.
Требования: О признании права собственности на земельный участок.
Обстоятельства: Истец ссылается на то, что является собственником доли садового дома, расположенного на испрашиваемом участке, предоставленном ему в пользование как члену садоводства.
Решение: Отказано.Суд апелляционной инстанции с приведенными выводами согласился, дополнительно указав на то, что выписка из протокола общего собрания членов СНТ «Электросила N 1» от 02.03.2019 не содержит ни сведений о распределении спорного земельного участка во владение В., ни оснований, на которых последняя владеет спорным земельным участком, что не подтверждает наличие совокупности условий, предоставляющих истице в соответствии с пунктом 2.7 статьи 3 Федерального закона 25 октября 2001 г. N 137-ФЗ «О введении в действие Земельного кодекса Российской Федерации» право приобрести земельный участок, предназначенный для ведения садоводства, без проведения торгов в собственность бесплатно.

Статьи, комментарии, ответы на вопросы

Зарегистрируйтесь и получите пробный доступ к системе КонсультантПлюс бесплатно на 2 дня

«Земельные участки и строения: вступление в права владения»
(выпуск 10)
(Жмурко С.Е.)
(«Редакция «Российской газеты», 2019)18 мая 2018 г. истец обратилась в ДГИ г. Москвы с заявлением о передаче ей в собственность земельного участка […], предоставив документы: выписку из протокола общего собрания СНТ «С», схему расположения земельного участка, план территории СНТ и справку о владении участком, однако письмом […] от 30.05.2018 Департамент отказал […] Я.В. в предоставлении государственной услуги, указывая в том числе, что представленная истцом копия из проекта (плана) СНТ «С» не может быть принята в качестве утвержденного в установленном порядке проекта организации и застройки территории СНТ.

Протокол выделения клеток

| Термо Фишер Сайентифик

Быстрые ссылки

  • Введение
  • Материалы
  • Протокол образцов тканевых культур
  • Протокол экстракции клеток

Связанная информация о продукте

  • Наборы ELISA
  • Наборы Quant-iT Protein для микропланшетов
  • Qubit Protein Quantitation

Введение

Первичные ткани являются ценным инструментом для изучения внутриклеточных и внеклеточных маркеров, характеризующих болезненные состояния. Мы разработали протокол для быстрого выделения цитокинов и сигнальных молекул из неповрежденной ткани. Этот метод предназначен для экстракции общего белка и использует неабразивный реагент для экстракции тканей. Образцы ткани всего 10 мг могут быть извлечены с использованием этого протокола. Этот метод чувствителен и позволяет выявлять связанные с заболеванием колебания биомаркеров. Это эффективная система для экстракции белков из различных типов тканей. Сердце, легкие, почки, селезенка, мозг, печень, тимус и гладкомышечные ткани были успешно извлечены с помощью этого протокола. Приготовленные экстракты совместимы с различными иммуноанализами, такими как ELISA и платформа Invitrogen Luminex, а также со всеми обычными анализами белка. Наш метод экстракции недорог, универсален и может быть выполнен менее чем за 15 минут. Мы предлагаем буфер для экстракции клеток для экстракции общего белка из различных типов образцов тканей.

ВЕРХ

Материалы

Приготовьте 1X буфер для лизиса клеток (буфер для экстракции клеток), используя следующий состав:

Буфер для экстракции клеток

  • 10 мМ трис, pH 7,4
  • 2 мМ Na 3 VO 4
  • 100 мМ NaCl
  • 1 % Тритон Х-100
  • 1 мМ ЭДТА
  • 10 % глицерин
  • 1 мМ ЭГТА
  • 0,1 % ДСН
  • 1 мМ NaF 9000 6
  • 0,5% дезоксихолат
  • 20 мМ Na 4 P 2 O 7

Доступен этот буфер для экстракции клеток — кат. № FNN0011.

Этот буфер для экстракции клеток можно разделить на аликвоты 1X в микроцентрифужных пробирках и хранить при –20°C до готовности к использованию. Оттепель на льду до извлечения клеток.

Дополнительные реагенты:

1 мМ PMSF
Коктейль ингибиторов протеазы (кат. № 78429) включено) просто перед использованием для приготовления полного буфера для экстракции клеток. Добавление коктейля ингибиторов протеаз и PMSF необходимо для ингибирования протеолиза в клеточных экстрактах. Для добавления PMSF мы рекомендуем сделать запас 0,3 М в ДМСО и добавить достаточный объем для конечной концентрации 1 мМ (т.е. 17 мкл на 5 мл буфера для экстракции клеток). PMSF очень нестабилен и должен быть добавлен непосредственно перед использованием, даже если он был добавлен ранее. В качестве добавки к коктейлю с ингибитором протеазы мы рекомендуем коктейль с ингибитором протеазы Halt (кат. № 78429).), восстановленный до 1X, и добавление 50 мкл на 5 мл буфера для экстракции клеток. Стабильность буфера для экстракции клеток, дополненного ингибитором протеазы, составляет 24 часа при 4°C.

Протокол образцов тканевых культур

  1. По истечении желаемого времени культивирования клеток пипеткой перенесите среду в микроцентрифужную пробирку и немедленно поставьте на лед.

  2. Центрифуга при 1400 об/мин в течение 1 минуты.

  3. Удалите надосадочную жидкость и аликвоту в чистую микроцентрифужную пробирку.

  4. Хранить при –80°C до использования в ИФА.

 

ВЕРХ

Протокол экстракции клеток

Обработка клеток

Этот метод можно использовать для получения относительно больших количеств клеточных экстрактов при каждом из изученных режимов стимуляции. Этапы промывки, включенные в эту процедуру, помогают свести к минимуму компоненты среды в клеточных экстрактах.

  1. Расчетная плотность клеток: Подвесных ячеек: Подсчитайте суспензию клеток путем подсчета в гемоцитометре. Адгезивные клетки: Оцените плотность клеток путем визуального осмотра под микроскопом. Установлено, что уровни слияния 70–80% оптимальны для многих исследований передачи сигнала.

  2. Стимуляция клеток по желанию.

  3. Перенесите клетки в чистые конические пробирки на 15 мл: Суспензия клеток: Аликвотируйте желаемое количество клеток в среде в чистые конические пробирки на 15 мл. Адгезивные клетки: Удалите клетки из сосуда соскобом. Перенесите среду, содержащую отдельные клетки, в чистые конические пробирки объемом 15 мл.

  4. Соберите клетки центрифугированием при 300 g в течение 7 минут.

  5. Аспирируйте среду.

  6. Ресуспендируйте осадок в ледяном PBS.

  7. Соберите клетки центрифугированием при 300 g в течение 7 минут при 4°C.

  8. Аспирируйте PBS.

  9. Лизируйте клетки, пипетируя полный буфер для экстракции клеток в каждую пробирку. Мы рекомендуем использовать 1 мл буфера для полной экстракции клеток на 10 8 кл. Важно отметить, что это значение может потребовать оптимизации для каждого конкретного приложения.

  10. Перенесите лизаты в чистые микроцентрифужные пробирки.

  11. Вортексируйте смесь, затем инкубируйте смесь на льду в течение 30 минут, время от времени встряхивая.

  12. Осветлить лизаты центрифугированием при 14 000 об/мин (13 000 g) при 4°C в течение 10 минут.

  13. Перенесите очищенные клеточные экстракты в чистые микроцентрифужные пробирки.

  14. Осветленные клеточные экстракты должны храниться при температуре –80°C до готовности к анализу. Избегайте повторяющихся циклов замораживания-оттаивания. При подготовке к проведению анализа дайте образцам оттаять на льду. Хорошо перемешайте перед анализом.

  15. Определите концентрацию белка с помощью подходящего метода, такого как набор для количественного анализа белка Invitrogen Quant-iT (кат. № Q33210). Экстракты клеток, приготовленные этим методом, обычно имеют концентрацию белка от 1 до 10 мг/мл.

  16. Для некоторых аналитов требуется этап обработки образца. Дополнительные сведения о рекомендациях по обработке образцов см. в протоколе для конкретного аналита.

  17. Все клеточные экстракты перед анализом с помощью наборов Invitrogen необходимо развести как минимум в соотношении 1:10 в буфере Standard Diluent Buffer.

TOP

BioSource C-070276 1107 1 января 2007 г.

Надежный метод за 6 простых шагов образцы. Коммерческие наборы упрощают процесс, но редко объясняют, что делают химические вещества, что затрудняет устранение неполадок в случае сбоя. Понимание того, как работает ядерная экстракция, может помочь вам получить лучшие результаты, позволяя устранять неполадки.

Вы когда-нибудь покупали набор в биотехнологической компании и следовали инструкциям только для того, чтобы понять, что вы не уверены, почему делаете определенные шаги предписанным образом? Случалось ли, что процесс когда-нибудь шел не так, как надо, и вам хотелось знать, что делает каждое химическое вещество?

Я обычно использую набор для извлечения ядер. Я уверен, что большинство из нас знает.

Неудивительно, что многие из этих наборов не содержат информации о составе реагентов и не объясняют их назначение.

В результате мы обычно следуем инструкциям набора, не зная, почему выполняются те или иные действия, а это не лучший способ заниматься наукой.

Давайте покончим с этим, хотя бы ради добычи ядер. Вот надежный и аннотированный протокол выделения ядер, в котором рассказывается, что делают реагенты, какие шаги необходимо выполнить и почему . Кроме того, вы узнаете несколько советов, как повысить урожайность ваших экстрактов!

Что такое ядерная добыча?

Экстракция ядер — это процесс разделения ядерной и цитоплазматической фракций клетки. [1] Это альтернатива протоколам лизиса целых клеток, например, с использованием буферов для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA).

Лизис целых клеток просто разрушает всю клетку, в результате чего образуется смесь цитоплазмы и ядра, а это означает, что мы получаем множество нежелательных клеточных губбинов, плавающих вокруг.

Экстракция ядер полезна при изучении молекул, которые специфически взаимодействуют с ядром, таких как факторы транскрипции, связывающие ДНК.

Простой 6-этапный протокол выделения ядер

Прежде чем начать, вам необходимо приготовить буферы для выделения цитоплазмы и ядра в соответствии с рецептами в разделе 9.0186 Таблица 1 и Таблица 2 ниже. Затем выполните следующие действия и всегда держите образцы на льду.

  1. Сбор клеток путем трипсинизации или соскоба. Затем промойте их фосфатно-солевым буфером (PBS). Сделайте это, как вы обычно собираете клетки для лизиса целых клеток. Включите ингибиторы протеазы и фосфатазы на этом этапе.
  2. Суспензируйте осадок клеток в 500 мкл буфера для экстракции цитоплазмы. Он гипотоничен и разрушает клеточную стенку, но сохраняет неповрежденной ядерную мембрану.
  3. Добавьте детергент, такой как 0,05% NP40, и вортексируйте, чтобы отделить ядра от цитоплазматической фракции. SDS не рекомендуется, так как он денатурирует, поэтому экстрагированные белки не будут в нативной форме.
  4. Центрифугируйте раствор и соберите надосадочную жидкость. Это должно содержать цитоплазму.
  5. Ресуспендируйте осадок (который содержит ядра) в 400 мкл буфера для выделения ядер и встряхивайте каждые несколько минут в течение 30 минут. Это разрывает ядерную мембрану. Обратите внимание, что вы можете включить глицерин на этом этапе, чтобы сохранить структуру и функцию образцов во время замораживания для будущих экспериментов, таких как анализы сдвига электрофоретической подвижности.
  6. Центрифугировать при ~25 000g при 4°C в течение ~15 минут и собрать надосадочную жидкость (содержащую ядерную фракцию). Последний осадок должен быть просто остатками клеточной мембраны. Откажитесь от него, когда будете уверены, что он вам не нужен.

Рецепт буфера для экстракции цитоплазмы

Таблица 1 . Рецепт буфера для экстракции цитоплазмы с объяснением того, что делают химические вещества.

20000000000005″ data-wptb-cells-width-auto-count=»3″ data-wptb-table-directives=»eyJpbm5lckJvcmRlcnMiOnsiYWN0aXZlIjoiYWxsIiwiYm9yZGVyV2lkdGgiOiIxIiwiYm9yZGVyUmFkaXVzZXMiOnsiYWxsIjpudWxsfX19″ data-wptb-extra-styles=»LyogRW50ZXIgeW91ciBjdXN0b20gQ1NTIHJ1bGVzIGhlcmUgKi8=» role=»table» data-wptb-header-background-color=»#93A82CFF» data-wptb-even-row-background-color=»#FFFFFFFF» data-wptb-odd-row-background-color=»#D4DBB3FF» data-table-columns=»3″ data-wptb-horizontal-scroll-status=»false» data-wptb-first-column-sticky=»false» data-wptb-pro-pagination-top-row-header=»true» data-wptb-rows-per-page=»3″ data-wptb-pro-search-top-row-header=»true» data-wptb-searchbar-position=»left»>

Реагент

Концентрация

Назначение

HEPES, pH 7,9 предложение Поддерживает стабильный рН.

Хлорид магния

1,5 мМ

Соль. Низкая концентрация способствует лизису клеток (гипотонию), но ее достаточно для растворения полярных видов за счет увеличения ионной силы раствора.

Калия хлорид

10 мМ

Соль. Цель как указано выше. Концентрация KCl может быть увеличена до 60 мМ, а хлорид магния исключен.

0,5 мМ

Восстановитель. Предотвращает вредное окисление.

1,0 мМ

Хелатирующий агент. Защищает образцы от деградации за счет хелатирования двухвалентных катионов.

Моющее средство. Способствует лизису клеток и растворению мембранных фракций и липидов. Замените на 0,05% IGEPAL® или Tergitol™.

Рецепт буфера для экстракции ядер

Таблица 2 . Рецепт буфера для ядерной экстракции с объяснением того, что делают химические вещества.

20000000000005″ data-wptb-cells-width-auto-count=»3″ data-wptb-table-directives=»eyJpbm5lckJvcmRlcnMiOnsiYWN0aXZlIjoiYWxsIiwiYm9yZGVyV2lkdGgiOiIxIiwiYm9yZGVyUmFkaXVzZXMiOnsiYWxsIjpudWxsfX19″ data-wptb-extra-styles=»LyogRW50ZXIgeW91ciBjdXN0b20gQ1NTIHJ1bGVzIGhlcmUgKi8=» role=»table» data-wptb-header-background-color=»#93A82CFF» data-wptb-even-row-background-color=»#FFFFFFFF» data-wptb-odd-row-background-color=»#D4DBB3FF» data-table-columns=»3″ data-wptb-horizontal-scroll-status=»false» data-wptb-first-column-sticky=»false» data-wptb-pro-pagination-top-row-header=»true» data-wptb-rows-per-page=»3″ data-wptb-pro-search-top-row-header=»true» data-wptb-searchbar-position=»left»>

Реагент

Концентрация

Назначение

HEPES, pH 7,9

Буфер. Поддерживает стабильный рН. Замените трис.

Хлорид магния

1,5 мМ

Соль. Помогает поддерживать растворимость полярных частиц за счет увеличения ионной силы раствора.

Хлорид натрия

300 мМ

Соль. Высокая концентрация помогает сбалансировать отрицательный заряд фосфатных групп ДНК. Также увеличивает ионную силу раствора.

0,5 мМ

Восстановитель. Предотвращает вредное окисление.

0,2 мМ

Хелатирующий агент. Защищает ДНК от деградации за счет хелатирования двухвалентных катионов.

Глицерин

Антифриз. Разрывает сеть водородных связей в воде, чтобы она не замерзала и не превращалась в лед.

Советы по улучшению извлечения

Даже самые лучшие протоколы могут нуждаться в модификации для решения сложных задач. Вот несколько основных советов по оптимизации извлечения ядер.

1.

Эксперимент со сдвигом для усиления лизиса

На этапах разрыва мембран (№2 и №5) вы встряхиваете образец для облегчения лизиса. Тем не менее, вортекса иногда недостаточно. Может помочь использование тонкой иглы 25-го калибра, чтобы помочь срезать клеточный материал.

2. Вортекс и инкубация в течение более длительного времени для лизиса ядра

На этапе выделения ядра (№5) ядро ​​может быть трудно лизировано. Многие протоколы рекомендуют встряхивать каждые несколько минут в течение всего периода от 30 минут до часа. По моему опыту, увеличение времени встряхивания и инкубации приводит к более высокому выходу.

3. Эксперимент с объемами ресуспендирования

Не всегда придерживайтесь объемов реагентов, рекомендованных наборами.

Уменьшение объема буфера для выделения ядер повысит концентрацию ядерных белков. Это необходимо, если вы хотите получить ядерные и цитоплазматические экстракты сопоставимых концентраций, поскольку общий ядерный белок почти всегда меньше, чем цитоплазматический белок.

4. Собирайте образцы по ходу дела

Независимо от того, насколько мы опытны, время от времени что-то пойдет не так. Собирайте примерно 10 мкл образца на каждом этапе, даже если вы не собираетесь его использовать или не подозреваете, что он содержит что-то ценное. И держи пока все.

Проанализируйте эти образцы с помощью подходящего анализа, такого как анализ Брэдфорда или любого другого метода, позволяющего обнаружить ваш образец. Это позволяет отслеживать образец в процессе экстракции. Только после того, как вы подтвердите, что ваш образец присутствует во фракции, которую вы ожидаете, вы должны отказаться от ненужного материала!

Как проверить свои результаты

После того, как вы выполнили извлечение ядра, как вы узнаете, что у вас действительно есть ядра в ядерной фракции и цитоплазма в цитоплазматической фракции?

Вы можете определить чистоту своих экстрактов, выполнив вестерн-блоттинг для конкретных производителей, которые, как мы знаем, конкретно присутствуют в каждом типе образца (ядро, цитоплазма, мембрана и т. д.).

Общие маркеры ядерных образцов включают:

  • гистоны — молекулы, вокруг которых обертывается ДНК.
  • ТАТА-связывающий белок — белок, который связывается с ТАТА-боксами на ДНК.

Общие цитоплазматические специфичные маркеры включают:

  • Белки теплового шока — они обычно находятся в митохондриях, а не в ядре.
  • Виментин — компонент цитоскелета.

Другие протоколы извлечения

Знание — сила. Хотя мы только что описали отличный протокол, ваша конкретная область исследования и тип образца могут потребовать специального протокола, объединенного из нескольких других, для получения наилучших результатов. Имея это в виду, вот еще три, на которые вы можете взглянуть:

  1. Протокол извлечения ядер Abcam.
  2. Протокол извлечения ядер Rockland.
  3. Протокол извлечения ядер ThermoFisher.

Подведение итогов того, что мы узнали об извлечении ядер

Теперь у вас есть простой протокол извлечения ядер, к которому вы можете вернуться.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *